SepaBean machine中全波段功能優勢

原創：三泰科技

在實驗過程中經常用到分離純化化合物的方法是傳統柱層析方法。相對的，快速液相製備色譜系統，俗稱「過柱機」，代替人工手動過層析柱的自動化儀器，具有提高分離效率，提高化合物的收率，降低分離時間和溶劑消耗等方面的優勢。本文主要為大家介紹三泰科技推出的SepaBean machine系列智能型快速液相製備色譜系統所具有的全波段功能，首先先簡單介紹一下DAD檢測器的工作原理。

• 工作原理

紫外檢測器，是基於溶質分子吸收紫外光的原理設計的檢測器。通過對特定波長下流通池內組分的吸光度轉化為相應電信號，電信號在短時間內形成峰形，用以顯示某個組分。

DAD檢測器是紫外檢測器的一個分支，主要特點是用光電二極管陣列的同時接受來自流通池的全光譜透過光，與普通紫外檢測器不同的是樣品池位於光柵的後方，同時將檢測器設置成一排二極管的陣列，這樣透過樣品池之後的光經過光柵分解成多束光，每個波長的光都會有一個對應的二極管檢測其強度，從而可以同時獲得多波長下信息。

圖1、二極管陣列檢測器檢測原理示意圖。

全波段掃描是二極管陣列檢測器具有的功能，可以在同一時間采集多個波長的信號，這些波長在該時間點下可以形成該時間點處樣品池內物質的紫外掃描圖譜，這個紫外圖譜就是全波段掃描。同一個物質對不同波長光的吸收情況不同，吸光度最大處對應的波長即為最大吸收波長，實驗過程中一般選擇對樣品有最大吸收的波長進行，以提高最大靈敏度和抗干擾能力，因此確定最大吸收波長對製備純化至關重要。

• 功能優勢

全波段掃描可以實時監測組分各波長下的吸收情況，還有全波段收集模式進行餾分收集，而且製備結束後還可以在歷史記錄中查看最大吸收波長，以及通過判斷各流出組分的全波段吸收譜圖有無差異，進行簡單的純度和定性分析，可謂功能「齊全」。

• 具體操作

全波段掃描

在SepaBean machine APP裏選擇正相分離或反相分離模式，先設置樣品信息和HPLC信息。進入【分離設置】界面設置相關信息，點擊【全波段】設置按鈕（如圖2所示），後面譜圖就會出現【全波段】采集圖譜，用藍色的線表現出來。

圖2、全波段設置界面。

全波段收集

1. 在【收集方式】裏面選擇【全波段收集】，選擇該模式時，全波段檢測自動開啟，根據檢測器波長範圍填寫波長掃描範圍、波長間隔、收集閾值，吸收值超過設定的閾值時收集；低於此值，則排廢液。在使用此收集模式時，應註意溶劑背景吸收問題，盡量選擇在波長掃描範圍內沒有背景吸收的溶劑。

圖3、全波段收集設置界面。

2. 設置全波段收集的參數：波長掃描範圍、波長間隔、收集閾值。

圖4、全波段收集參數設置。

確認最大吸收波長

目標組分的最大吸收波長：一般情況下同一組分最大吸收波長是比較固定的，如圖5中樣品組分的最大吸收波長為232 nm（以紅色橢圓標出）。

圖5、歷史記錄中收集組分最大波長查看界面。

簡單的純度分析

特徵吸收光譜的差異：同一樣品由於進樣量的區別，在整體吸收強弱上會有區別，但是具體特徵不會變化。如已知該組分在某一波長下無吸收，但是全波段數據卻顯示有特徵吸收，則證明該物質不純，如圖6中組分已知在600 nm下無吸收，但是檢測結果卻有吸收，如圖中藍色橢圓標記的位置，樣品在600 nm處有明顯吸收，則證明其純度不高。

圖6、歷史記錄中收集組分初步純度判斷界面。

在樣品檢測波長未知的情況下，全波段掃描及全波段收集模式的功能至關重要。SepaBean machine系列快速液相製備色譜系統中采用的【全波段掃描】模塊，在製備過程中，可以隨時監測到每個組分的各個波長下得吸光度情況，了解樣品的最大吸收波長並根據全波段譜圖進行初步純度判斷及簡單定性。

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